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快速测定食用油中3种邻苯二甲酸酯含量的方法
邻苯二甲酸酯类物质（简称PAEs），俗名塑化剂，是常用的增塑剂，主要用于塑料制品中增加其韧性、塑性，被广泛应用在食品包装材料中[1-3]。但是在塑料制品中，PAEs与塑料分子结合力较弱，随着塑料制品的老化，PAEs很容易从其中释放出来，迁移到与之接触的食品中[4-7]。尤其PAEs是脂溶性物质，因此极易迁移到食用油中，造成油脂污染[8-9]。
研究表明，PAEs的急性毒性并不明显，但是长期摄入累积，可引起肝、肾、肺及心脏、生殖等多组织系统的中毒，其中以雄性生殖系统损害最为明显[10-16]。因此原卫生部《关于通报食品及食品添加剂邻苯二甲酸酯类物质最大残留量的函》(卫办监督函〔2011〕551号)明确规定了食用植物油中的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）和邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）最大残留量分别不得超过0.3、1.5、9.0mg/kg。
由于GC-MS具有对目标物定性定量准确、对痕量物质分析灵敏度高等优点，可应用在食品中邻苯二甲酸酯类含量的测定。本试验主要对食用植物油的前处理条件进行优化，使得前处理具有快速、准确的优势，利用GC-MS测定DBP、DEHP和DINP的含量，以期为企业大批量的测定食用植物油中PAEs提供方法参考。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1原料与试剂
16种PAEs混标（10mg/L，1mL，上海安谱）：邻苯二甲酸二甲酯(DMP)，邻苯二甲酸二乙酯(DEP)，邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)，邻苯二甲酸二丁酯(DBP)，邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)，邻苯二甲酸二甲氧乙酯(DMEP)，邻苯二甲酸二戊酯(DPP)，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯(DEEP)，邻苯二甲酸二己酯(DHXP)，邻苯二甲酸丁苄酯(BBP)，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯(DBMP)，邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)，邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)，邻苯二甲酸二苯酯(DPHP)，邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP)，邻苯二甲酸二壬酯(DNP)。邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）标准品（1000mg/L，2mL），上海安谱；乙腈，正己烷，丙酮；二氯甲烷，色谱纯；SBEQ-CA8645玻璃纯油基质萃取管，上海安谱；1g/6mLPSA/SPE小柱，迪马公司；一次性玻璃滴定管；1mL玻璃样品瓶；油脂样品均购于沃尔玛超市。
1.1.2仪器与设备
7890B-5977B气相色谱-质谱联用仪，安捷伦公司；EOFO-945066型Talboys数显型多管式旋涡混合器，美国Talboys；TD5A-WS台式低速离心机。
1.2试验方法
1.2.1标准溶液的配制
16种PAEs标准工作液：用正己烷配制0.00、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00μg/mL的16种PAEs标准系列溶液。于-20℃保存。
DINP标准工作液：用正己烷配制0.0、0.5、10、2.5、5.0、10.0、20.0μg/mL的DINP标准系列溶液。于-20℃保存。
1.2.2样品前处理
1.2.2.1本试验方法
用一次性玻璃滴定管取0.5g（精确至0.0001g）植物油于10mL纯油基质萃取管中，加入2mL乙腈，放入旋涡混合器中于2500r/min下混匀萃取5min，然后4000r/min离心2min，取出后将上清液移入1mL样品瓶中，待GC-MS测定。
1.2.2.2GB5009.271—2016方法
食用植物油混匀后，准确称取0.5g(精确至00001g)于10mL具塞磨口离心管中，依次加入100μL正己烷和2mL乙腈，涡旋1min，超声提取20min，4000r/min离心5min，收集上清液。残渣中加入2mL乙腈，涡旋1min，4000r/min离心5min。再加入2mL乙腈重复提取1次，合并3次上清液，待SPE净化。
取PSA/SPE小柱，依次加入5mL二氯甲烷、5mL乙腈活化，弃去流出液；将待净化液加入PSA/SPE小柱，收集流出液；再加入5mL乙腈，收集流出液，合并两次收集的流出液，加入1mL丙酮，40℃氮吹至近干，正己烷准确定容至2mL，涡旋混匀，供GC-MS分析。
1.2.3仪器条件
GC条件：HP-5-MS色谱柱(30m×0.25mm×025μm)；进样口温度260℃；程序升温为初始柱温60℃，保持1min，以20℃/min升温至220℃，保持1min，再以5℃/min升温至250℃，保持1min，再以20℃/min升温至290℃，保持7.5min；载气为高纯氦气(纯度>99.999%)，流速1.0mL/min；进样方式为不分流进样；进样量1μL。
MS条件：电离方式为电子轰击电离源(EI)；电离能量70eV；传输线温度280℃；离子源温度230℃；四级杆温度150℃；监测方式为选择离子扫描(SIM)；溶剂延迟7min。
1.2.4定性确认
在1.2.3仪器条件下，待测样品和PAEs标准品的目标化合物在相同保留时间处(±0.5%)出现，并且对应质谱碎片离子的质荷比与标准品的质谱图一致，其丰度比与标准品相比应符合表1，3种PAEs的定性和定量离子见表2。结合丰度比和定性离子可定性目标化合物。
2结果与分析
2.1标准曲线和检出限
将标准系列工作液分别注入GC-MS中，每个质量浓度平行测定3次，测定相应的PAEs色谱峰面积，以标准工作液的质量浓度(X)为横坐标，以相应的峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。DINP的标准系列工作液单独进样测定。取某一低质量浓度的标准溶液，用空白植物油逐级稀释，按照1.2.2.1方法处理后，以3倍信噪比所对应的质量浓度为检出限（LOD），以10倍检出限作为定量限（LOQ），结果见表3。
由表3可知，DBP和DEHP的线性范围在0~1.0μg/mL之间，相关系数大于0.999，DINP的线性范围在0~20μg/mL之间，相关系数为0.9994，表明DBP、DEHP和DINP的线性均良好。DBP、DEHP和DINP的LOD和LOQ均分别为0.05μg/mL和05μg/mL。
2.2本方法的影响因素
2.2.1空白试验
实验中尽量避免使用塑料制品，对于玻璃器皿，用超纯水洗净，烘干后，使用前用色谱纯正己烷清洗3~4遍，甩干，待正己烷挥发后使用。每次试验用的试剂都进GC-MS测定其PAEs含量，待测定值在检出限以下，方可使用。
2.2.2净化管的选择
采用安谱的纯油基质萃取管作为净化管，该基质主要是活化的氧化铝，吸附油脂性能较好，价格较低，8元/根。而国标采用的PSA/SPE固相萃取柱（1g/6mL）虽然净化效果好，但价格昂贵，需40元/根。考虑到企业检测样品数量众多，在除油效果良好、对GC-MS无污染、价格低廉的情况下，采用安谱的纯油基质萃取管作为净化管。
2.2.3乙腈萃取量的影响
称取空白一级菜籽油0.5g，加入适量标准溶液，使其分别含0.5μg/mL的DBP、DEHP和DINP溶液，分别加入2、4、6mL乙腈，在2500r/min下混匀萃取5min，离心2min，而后测定该样品中DBP、DEHP、DINP的含量。试验结果表明：分别加入2、4、6mL乙腈萃取时，样品中DBP、DEHP和DINP的加标回收率为95%以上。故试验选择2mL作为乙腈萃取量。
2.2.4萃取时间的影响
本试验方法中，称取空白一级菜籽油0.5g，加入适量标准溶液，使其分别含0.5μg/mL的DBP、DEHP和DINP溶液，加入2mL乙腈，分别在旋涡混合器中2500r/min下混匀萃取5、10、15、20min，离心2min，而后测定该样品中DBP、DEHP、DINP的含量。试验结果表明：当萃取时间分别为5、10、15、20min时，样品中DBP、DEHP和DINP的加标回收率均能达到95%以上。故试验选择5min作为萃取时间。
2.2.5萃取方式的影响
本试验方法中，称取空白一级菜籽油0.5g，加入适量标准溶液，使其分别含0.5μg/mL的DBP、DEHP和DINP溶液，加入2mL乙腈，分别在旋涡混合器中于2500r/min下萃取5min和超声20min，离心2min，而后测定该样品中DBP、DEHP、DINP的含量。试验结果表明：采用旋涡混合器萃取的效果与超声萃取效果相当，旋涡混匀萃取和超声萃取的样品中DBP、DEHP和DINP加标回收率均在95%以上。本试验选择旋涡混匀作为萃取方式。
2.3仪器稳定性
将低（0.02μg/mL）、中（0.5μg/mL）、高（1.0μg/mL）3种质量浓度的标准溶液进入GC-MS中进行测定，重复测定6次，计算3种质量浓度的相对标准偏差（RSD）分别为5.6%、4.5%和4.1%，均在10%以下，说明仪器稳定性良好。
2.4方法准确性
将未测出DBP、DEHP和DINP的一级菜籽油作为本底，向其中加入标准溶液，配制成低（0.02μg/mL）、中（0.5μg/mL）、高（1.0μg/mL）3种质量浓度的加标样。分别采用本试验方法和GB5009.271—2016进行前处理。每个水平平行测定6次，计算平均回收率和RSD。结果见表4。
从表4可看出，在本试验方法中，当加标量分别为0.02、0.5μg/mL时，DBP、DEHP和DINP的加标回收率分别为103%~112%、96%~113%、95%~97%，RSD分别为5.5%~5.9%、5.0%~6.6%和3.5%~5.5%。当加标量为1.0μg/mL时，DBP、DEHP和DINP的加标回收率分别为73%、64%和62%，RSD分别为5.6%、4.6%和3.3%。
在GB5009.271—2016方法中，当加标量分别为0.02、0.5μg/mL时，DBP、DEHP和DINP的加标回收率分别为96%~114%、95%~108%、103%~109%，RSD分别为6.6%~7.9%、5.3%~86%和4.8%~9.7%。当加标量为1.0μg/mL时，DBP、DEHP和DINP的加标回收率分别为89%、74%和72%，RSD分别为6.7%、5.8%和7.2%。
由此可见，当加标量在0.5μg/mL时，两种方法的加标回收率均在95%以上。但当加标量在1.0μg/mL时，国标方法的回收率较高，原因是萃取的次数较多，萃取较完全。但是国标方法萃取次数多，耗时长，容易二次污染，且0.5μg/mL的加标回收率达95%以上时完全能满足日常食用植物油中的DBP、DEHP和DINP的测定。
2.5样品比对结果
将5个不同的油样送到通标标准技术服务有限公司（简称SGS）进行DBP、DEHP和DINP含量的测定，并分别采用本试验方法和GB5009.271—2016进行测定，将三者的结果进行比对。结果见表5。
由表5可知，本试验方法测定结果与GB5009.271—2016和SGS的测定结果基本一致，说明本试验方法测定的结果准确、可靠。
2.6实际样品的测定
随机抽取9份不同油样应用本方法测定DBP、DEHP、DINP含量，结果见表6。
由表6可知，随机抽取的9份油样测定的DBP、DEHP和DINP含量均在国家标准限量之下，这对于消费者的食用是安全的。
3结论
本试验建立了一种用于食用植物油中DBP、DEHP和DINP含量的快速测定方法。采用加标回收率作为判断标准，分别对油脂净化管的选择、萃取量、萃取方式和萃取时间进行了试验，建立了一种快速、简便、准确的检测方法。利用该方法，DBP和DEHP在0~1.0μg/mL质量浓度范围内，相关系数均大于0.999；DINP在0~20μg/mL质量浓度范围内，相关系数为0.9994；且DBP、DEHP和DINP的检出限和定量限均分别为0.05、0.5μg/mL。0.5μg/mL的加标样品中的DBP、DEHP和DINP回收率均在95%以上，RSD在10%以下。采用本试验方法测定的结果与GB5009.271—2016和SGS测定结果基本一致。
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